編號:ISH-7001

說(shuō)明書(shū)
產(chǎn)品名稱(chēng):

EBER檢測試劑盒(原位雜交法)

詳詢(xún)


詳細信息:
分類(lèi):分子病理
子分類(lèi):原位雜交(地高辛標記)
規格:50測試/盒,100測試/盒,300測試/盒
檢驗方法:1、 檢驗所需儀器、設備:移液器、恒溫箱、雜交儀、計時(shí)器、孵育盒、染色架、蓋玻片、光學(xué)顯微鏡、洗瓶。
2、 試劑準備:
a) DAB顯色液需要在使用前配制。配制方法:在小試管中按 20 倍稀釋比例依次加入 DAB 底物緩沖液及 DAB 濃縮顯色液(棕褐色液體)混勻。配置好的 DAB 顯色液 2~8℃避光存放,24小時(shí)內有效。
b) PBS 緩沖液需要先配制成溶液,再加入 0.01%體積的 Tween-20(1L 約加入2~3滴)。
3、 操作程序
a) 脫蠟
石蠟切片置于新鮮脫蠟液中,浸泡10分鐘×3 次;去除多余的液體后,置于無(wú)水乙醇中,浸泡3分鐘×3次;經(jīng)空氣干燥5~10分鐘。
b) 封閉
空氣干燥后的組織,根據大小,滴加 80~100uL封閉液,室溫避光孵育10分鐘,純水洗去封閉液后,梯度乙醇脫水(75%,95%。100%各2分鐘),空氣干燥。
c) 酶處理
空氣干燥后的組織,根據大小,滴加 80~100uL胃酶工作液,37℃孵育,根據不同組織類(lèi)型及切片厚度調整孵育時(shí)間5~30分鐘。棄去胃酶工作液后,梯度乙醇脫水(75%,95%,100%各2分鐘),空氣干燥。
d) 滴加探針或空白對照試劑
根據組織大小,組織上滴加5~10uL地高辛標記的EBER探針或空白對照試劑,加硅化蓋玻片,橡膠水泥封邊。37℃雜交孵育2~4小時(shí)或過(guò)夜(原位雜交儀內或濕盒內)。
e) 去除雜交蓋玻片
小心去除橡膠水泥,將玻片浸入PBS緩沖液內10分鐘,蓋玻片自然滑落(期間提拉玻片數次促進(jìn)蓋玻片滑落)。阻水筆畫(huà)圈。PBS緩沖液沖洗2分鐘×3次。
f) 滴加HRP標記抗地高辛抗體
根據組織大小,滴加30~50uL HRP標記抗地高辛抗體,37℃孵育30分鐘;PBS緩沖液沖洗2分鐘×3次。
g) DAB顯色
根據組織大小,加入適量新鮮配制的DAB顯色液,室溫孵育5~10分鐘,注意鏡下觀(guān)察顯色情況。
h) 復染
自來(lái)水沖洗,蘇木素染色液復染5~10秒;分化、沖洗返藍。
i) 脫水、透明、封片。
j) 閱片,陽(yáng)性染色定位于細胞核。
4、 結果判定,染色結果須由有資質(zhì)的病理醫生對染色后的組織片在光學(xué)顯微鏡下觀(guān)察并進(jìn)行判讀。
預期用途: 用于原位雜交細胞組織上的核酸靶點(diǎn)的檢測。
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